生化定标基础知识
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- 发布时间:2023-08-15
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【概要描述】 生化定标基础知识-洛阳恒恩生物科技有限公司-1、什么是定标(生化仪测定原理)朗伯-比尔定律是生化仪的理论基础,样本+试剂进行反应,测得的是吸光度(A),需要转化成浓度(或者活力单位)才有临床意义。因此需要建立浓度(或活力单位)和吸光度之间的关系。定标,即测定已知浓度(或活力单位)的校准品,根据生化仪测得的吸光度,进行拟合,得到浓度和吸光度之间的关系曲线---校准曲线,将样本+试剂反应的吸光度带入校准曲线,就可以得到浓度。(如下图所示)
生化定标基础知识
【概要描述】生化定标基础知识-洛阳恒恩生物科技有限公司-1、什么是定标(生化仪测定原理)朗伯-比尔定律是生化仪的理论基础,样本+试剂进行反应,测得的是吸光度(A),需要转化成浓度(或者活力单位)才有临床意义。因此需要建立浓度(或活力单位)和吸光度之间的关系。定标,即测定已知浓度(或活力单位)的校准品,根据生化仪测得的吸光度,进行拟合,得到浓度和吸光度之间的关系曲线---校准曲线,将样本+试剂反应的吸光度带入校准曲线,就可以得到浓度。(如下图所示)
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1、什么是定标(生化仪测定原理)朗伯-比尔定律是生化仪的理论基础,样本+试剂进行反应,测得的是吸光度(A),需要转化成浓度(或者活力单位)才有临床意义。因此需要建立浓度(或活力单位)和吸光度之间的关系。定标,即测定已知浓度(或活力单位)的校准品,根据生化仪测得的吸光度,进行拟合,得到浓度和吸光度之间的关系曲线---校准曲线,将样本+试剂反应的吸光度带入校准曲线,就可以得到浓度。(如下图所示)
2、生化试剂的相关基础(上机要点)参数设置内容:波长(主副波长),反应时间、样品量、试剂量、读点时间、反应方向、分析方法、校准方法、校准浓度等。3、生化反应的监测根据反应类型的不同,曲线被分为反应曲线、校准曲线等。(下图是反应曲线示例)
反应曲线的纵坐标为吸光度值,横坐标为反应时间。反应时间即测光点,当一个反应杯通过一次光度计光路时,就会被测定一次吸光度,两次通过光路的间隔就是一次读点时间,也可以说反应盘旋转一圈所用的时间。反应曲线是反应监测的主要信息内容。在反应曲线上能看到样品、试剂加入时的时间、对应吸光度。除反应曲线监测外,平时还有试剂空白监测,查看试剂空白吸光度。校准曲线是反映校准的过程,并为计算结果提供依据。校准曲线根据校准方法分为线性曲线和非线性曲线两种;根据校准点的多少分为单点线性曲线和多点线性非线性曲线。(下图是校准曲线)
校准曲线的纵坐标是吸光度轴,横坐标是浓度轴。线性曲线有一点或多点,过零点和不过零点多种。非线性曲线一般都是多点,有样条曲线(Spline)、对数曲线(Logit-Log3P、Logit-Log4P、Logit-Log5P)、函数曲线、折线曲线等。在参数正确的情况下,校准曲线的每个点是校准品和相应试剂反应后的结果。校准曲线结果与校准方法的选择,会直接影响结果的准确和稳定。4、定标影响因素①重复性不好校准品没有混匀或者试剂稳定性较差,可通过精密度实验排查原因。②校准类型根据校准品浓度和吸光度之间呈现的关系,选择合适的校准类型。如果校准品浓度和吸光度呈线性关系,则不建议使用样条函数拟合;Logit双对数函数3P、4P、5P,虽然都是“收敛型”函数,但是收敛程度不一样,根据收敛程度确定合适的双对数函数校准类型。③校准品浓度校准品浓度如果设置不合理,有可能拟合结果较差,导致点不在校准曲线上,定标回测较差。
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